妊娠中晚期羊水细胞培养与染色体核型分析在产前诊断中的应用

--临床研究--

（景德镇市妇幼保健院检验科，江西  景德镇  333000）

Application of amniotic fluid cell culture and karyotype analysis in prenatal diagnosis

Xu Jingna

摘要： 目的  探讨妊娠中晚期羊水细胞培养与染色体核型分析在产前诊断中的应用效果。方法  选取2018年1月至2018年12月在本院进行产前诊断的妊娠中晚期孕妇90例，收集其羊水标本进行羊水细胞培养，然后进行染色体核型分析，统计其在产前诊断中的应用价值。结果  90例妊娠中晚期孕产妇羊水细胞培养获得完全成功，成功率为100.00%，制片后分裂的平均数值不小于60个/例。染色体异常者15例（16.67%），其中染色体异常核型者10例（11.11%），包括21三体者4例（4.44%）、18三体者4例（4.44%）、性染色体异常者1例（1.11%）、其他异常者1例（1.11%），染色体多态性5例（5.56%）。结论  在妊娠中晚期进行羊水细胞培养与染色体核型分析，不仅羊水染色体培养成功率高，而且染色体分裂较多，可满足临床任娠中晚期孕妇产前诊断的需求，应用效果好。

关键词： 妊娠中晚期；羊水细胞培养；染色体核型分析；产前诊断；应用价值

染色体病是由染色体数目或者结构出现异常所造成的，是新生儿缺陷发生的最主要因素之一。存在染色体病的胎儿在出生后，往往呈现智力低下表现，其器官也会出现畸形发育等一系列疾病综合征。在当前的医疗条件下，染色体病尚且没有特效的治疗手段，不仅会对社会以及家庭带来严重的经济负担，而且该类患儿寿命较短，会对家庭成员带来沉重的精神打击^[1]。目前，产前诊断是早期筛查染色体病的最有效的措施。并且随着超声检测技术的不断发展和完善，越来越多的染色体异常胎儿在妊娠的中晚期被及时发现，可在诊断明确的情况下即使终止妊娠^[2]。染色体产前诊断包括侵入性以及非侵入性两种，其中羊水细胞培养与染色体核型分析均为常见诊断方法，均有一定的效果。基于此，本研究进一步探讨妊娠中晚期羊水细胞培养与染色体核型分析在产前诊断中的应用效果，现报道如下。

1  资料与方法

1.1  临床资料  选取2018年1月至2018年12月在本院进行产前诊断的妊娠中晚期孕妇90例为研究对象，其中年龄18～42岁，平均年龄（28.51±4.16）岁；孕周18～24周，平均孕周（20.14±3.13）周。

1.2  纳入排除标准  纳入标准：签署知情同意书且配合研究者；单胎、胎位正常的孕妇。排除标准：患心脏、肝脏、肾脏等器官疾病者；患精神疾病者；凝血功能障碍者；患恶性肿瘤者。

1.3  方法  ①接种培养。利用B超进行引导定位、选取穿刺点，严格遵循无菌操作进行穿刺，抽取20 mL羊水置入试管中送检。将清亮羊水以2000 rpm的速度离心10 min处理，在血性羊水中滴入1滴无菌肝素后离心。舍弃上层清液各留取沉淀悬液大约1 mL；吹匀后吸取4 mL液体培养基（GIBCO）到培养瓶中进行接种处理，放于37 ℃ 5%浓度的CO₂恒温培养箱中，进行6～7 d的贴壁培养。②换液培养。使用倒置显微镜观测羊水细胞贴壁表现，贴壁表现好，改换为4 mL的新鲜培养基，妊娠晚期的羊水，增加换液次数；对血性羊水以及杂质较多细胞，在无菌环境下使用0.9%氯化钠溶液进行冲冼后再改换为新鲜培养基，继续培养1～2 d收获。③收获。观察细胞培养生长情况，当观测到细胞由梭形向圆形变化且圆形细胞量占据大多数时可进行收获，收获时加减弱秋水仙素浓度，延缓秋水仙素作用进程，提高细胞收获数量。在进行细胞时使用2 mL浓度为0.25%的EDTA胰酶在37 ℃温度下消化8 min，利用培养液结束消化进程。把收获的细胞移动至15 mL的离心管中，采取2000 rpm的速度离心10 min，舍弃上层清液各留取沉淀悬液沉淀后加入10 mL 1%柠檬酸钠低渗液，在37 ℃温度下低渗15 min，加入1～2 mL固定液（甲醇:冰醋酸=3:1）进行3 min预固定，采用上述离心速度离心10 min，增加6 mL固定液固定两次。④制片。进行染色体玻片制备，离心后吸取上清液留存1 mL底物吹打混匀，滴片后在自然状态下晾干，在75 ℃温度下进行2～3 h的烘烤后常规G显带。⑤染色体核型镜检分析。每例羊水染色体标本显带后，镜下常规计数20个核型，对其中的5个染色体核型进行分析，如果核型出现数目异常则加倍计数，对染色体异常核型进行描述。

1.4  观察指标  对羊水染色体检查情况进行统计，包括羊水细胞培养成功率、染色体核型异常情况、异常类别、多态性情况。

2  结果

90例妊娠中晚期孕产妇羊水细胞培养获得完全成功，成功率为100%。培养收获时间为7～10 d，平均（8.50±0.05）d。制片后分裂的平均数值不小于60个/例，常规计数20个核型，再对5个核型进行分析，90例孕产妇羊水细胞培养染色体标本中，染色体异常者15例（16.67%），其中染色体多态性5例（5.56%）、染色体异常核型者10例（11.11%），包括21三体者4例（4.44%）、18三体者4例（4.44%）、性染色体异常者1例（1.11%）、其他异常者1例（1.11%）。见表1。

表1  羊水染色体染色体异常检出情况

3  讨论

伴随产前诊断的广泛应用，人们对在妊娠中晚期进行染色体产前诊断的要求也在不断增加。在妊娠中晚期进行产前检测的穿刺技术要求相对较高，穿刺不良造成的流产风险也相对较大，羊膜腔穿刺行羊水染色体核型分析是临床应用较为广泛且安全性能较高的一种产前检测技术^[3-4]。其中的羊膜腔穿刺在应用过程中取材较为方便，安全性较高，适用于中、晚期取材，并且能对胎儿染色体异常类型进行准确且高效的辨别与诊断^[5]。

羊水细胞培养与染色体核型分析是对羊水中胎儿脱落的表皮细胞进行培养然后对其染色体体核进行分析^[6]。但是需要注意的是，羊水细胞培养技术操作要求较高，且在细胞培养的过程中，存在培养持续时间长，污染的概率大、细胞分裂情况较少等缺点，尤其是在妊娠中晚期，一般在妊娠23周以后，羊水中胎儿脱落的表皮细胞存活能力差，存活量少，并且含有一定的有形成分胎脂、胎儿粪便以及已经死亡的上皮细胞，对羊水细胞贴壁培养造成影响，增加羊水细胞培养的难度，延长培养周期^[7]。本研究中对针对上述羊水细胞培养以及染色体核型进行分析过程中存在的问题进行分析并进行相应的改良。在进行羊水细胞接种时，增加羊水细胞接种量，选取3 mL左右的接种量并在进行30～40次的吹打后才予以接种，对羊水细胞壁使用无菌的细胞刮刀刮取其贴壁细胞，用吸管反复进行吹打混匀后再进行6～7 d的贴内壁培养，根据其生长情况进行新鲜培养基更换，；针对妊娠晚期的羊水，增加换液次数；对血性羊水以及杂质较多细胞，在无菌环境下使用0.9氯化钠溶液进行冲冼后再改为新鲜培养基^[8]。该方式大大刺激了羊水细胞的生长速度，增加了待检测的分裂细胞量，避免因待检细胞不足造成的实验数据不准确情况的出现。在收获时，将使用2ml浓度为0.25% EDTA胰酶在37 ℃温度下消化8 min，利用培养液结束消化进程，大大增强了细胞的生存率。同时使用1%柠檬酸钠低渗液，在37 ℃温度下低渗15 min，加入1～2 mL固定液（甲醇:冰醋酸=3:1）进行3 min预固定，可获取更为优质的染色体分裂相以及染色体形态^[9]。本研究结果显示，90例妊娠中晚期孕产妇羊水细胞培养获得完全成功，成功率为100%。培养收获时间为7～10 d，平均（8.50±0.05）d。90例孕产妇羊水细胞培养染色体标本中，染色体异常者15例（16.67%），其中染色体多态性5例（5.56%）、染色体异常核型者10例（11.11%），包括21三体者4例（4.44%）、18三体者4例（4.44%）、性染色体异常者1例（1.11%）、其他异常者1例（1.11%）。

综上所述，羊水细胞培养与染色体核型分析应用于妊娠中晚期的产前检测中，能取得较高的羊水细胞培养成功率，并且能够实现对染色体异常情况以及染色体异常核型的高效检测与分析。

参考文献

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