血吸虫病患者血吸虫循环抗原和抗体及血吸虫虫卵抗体联合检测分析

时间:2020-03-26 15:51 来源:当代医学 作者:周亚军1,丁园2,熊涛2

临床研究

 

通讯作者:丁园,E-mail 569314511@qq.com

 



1.湖北省血吸虫病临床诊疗中心(荆州市第三人民医院)检验科,湖北  荆州  4340012.湖北省汉川市人民医院检验科,湖北  孝感  431600

摘要:目的  分析在血吸虫病患者中应用血吸虫循环抗原、抗体、虫卵抗体联合检测的临床诊断价值。方法  将201712月至201812月期间在本院就诊并经病原学检查确诊的240例血吸虫病患者进行观察,对患者分别进行血吸虫循环抗原、血吸虫抗体、血吸虫虫卵抗体单项检测及联合检测,记录、对比其检测结果。结果  单独检测中血吸虫循环抗原检出率<血吸虫抗体、血吸虫虫卵抗体P0.05);联合检测中三种方法联合检测阳性率>血吸虫抗体+虫卵抗体>循环抗原+虫卵抗体与循环抗原+抗体(P0.05)。结论  在血吸虫病患者中采用三种方法联合检测的检出率高,优于各种方法单独检测,值得推广。

Combined Detection and Analysis of circulating Antigen and Antibody of Schistosoma and Schistosoma Egg Antibody in patients with Schistosomiasis

1 Zhou ya jun, 2 Ding Yuan, 2 Xiong Tao

关键词血吸虫病血吸虫抗体;循环抗原虫卵抗体;联合检测

血吸虫病是由寄生虫感染引起的一种慢性传染性疾病,传播途径广泛,危害性大,会对人体免疫系统、神经系统造成损伤,不及时控制易引发肝硬化、消化道出血等严重并发症,危及患者生命安全[1]。目前临床对该疾病的诊断以病原学检测、免疫学检测两种实验室检测方式最为常见,病原学检查主要通过粪便、尿液进行检测,准确率高,但对中度、轻度感染患者敏感性较低,检出率低,操作繁琐[2];免疫学检测具有较高的灵敏性、特异性,操作方便,实用性强,在临床实验室检查中应用较为广泛,成为检测血吸虫病的常用手段。免疫检测诊断血吸虫病包括对血吸虫循环抗原、抗体、虫卵抗体的检测,有相关研究表明,该疾病通过单一的检测方法诊断取得的效果不理想,漏检率较高[3]。本文就在血吸虫病患者中应用免疫学方法联合检测的诊断价值进行探究,旨在为血吸虫病的预防、治疗提供参考依据,现报道如下。

1  资料与方法

1.1  临床资料  观察对象选用本院在201712月至201812月间接收的240例血吸虫病患者。该研究已通过医院伦理委员会的批准。纳入标准:均结合患者临床表现及病原学检测结果明确诊断;均清楚本次实验内容并自愿签署知情同意书接受检测。排除合并血液系统疾病及脏器性疾病者;配合度低及资料不全者。240例患者中男134例,女106例;年龄2567岁,平均(47.1±4.5)岁;其中31例为晚期血吸虫病,209例为慢性血吸虫病。

1.2  检测方法  收集240例患者的血清标本,进行血吸虫循环抗原、血吸虫抗体、血吸虫虫卵抗体单一检测及联合检测。具体方法:①血吸虫循环抗原检测。采用酶联免疫吸附试验法(四川迈克生物科技股份有限公司;试剂盒生产批号为0810091)对循环抗原进行检测,严格按照试剂盒说明书进行操作。将可溶性虫卵抗原液加入相应标板孔中,100μL/孔,置于4℃的夜间环境下贮存,进行洗涤,再加入稀释后的血清100μL,采用微波重复辐射6次,10 s/次。再次洗涤,加入100μL酶结合物后再次进行辐射;再次洗涤后加入底物溶液100μL,反应时间为15min,最后加入硫酸50μL停止反应。进行A值读取,校正样品A值即为检测样品A值与阳性对照A值的比值,当校正样品A值与阴性对照平均A值比值为2.1时,则为阳性。②血吸虫抗体。用胶体染料法(无锡赛德科技开发有限公司;试剂盒生产批号为3400930)进行检测。取聚氯乙烯杯,加入染料标记液50μL、血清20uL,混合均匀后用试纸检测。阳性:检测试纸与对照试纸均呈紫蓝色。阴性:检测试纸未出现色带,对照试纸呈紫蓝色。③虫卵抗体。用胶体金免疫渗滤斑点法(岳阳迅超生物技术有限公司;试剂盒生产批号为3400089)进行检测。用磷酸盐缓冲液(PBS)将金标葡萄球菌A蛋白(SPA)进行稀释,浓度为120,置于4℃的环境下贮存。选取方形塑料盒,于底盖中央做直径为7mm的圆孔,依次置入吸水垫料、混合纤维素酯膜(MC),盖紧盒盖。将2μL金标SPA、可溶性虫卵抗原液分别滴于MC的上、下方,加入封闭液贮存。依次加入血清50μL、金标SPA 100μLPBS洗涤液50100μL。阳性:抗原点出现粉红色斑点。阴性:未见显色反应。

1.3  观察指标  ①单独检测检出情况;②各项联合检测检出情况。
1.4  
统计学方法 
本研究数据均用SPSS 21.00统计软件处理,计数资料用例数(n)表示,计数资料组间率(%)的比较采用χ2检验;以P0.05为差异有统计学意义。

2  结果

2.1  单独检测检出情况  血吸虫抗体、血吸虫虫卵抗体单独检测对晚期血吸虫病、慢性血吸虫病的检出率均高于血吸虫循环抗原P0.05),见表1

1  单独检测检出率对比(n%

组别

血吸虫病

n=240

晚期血吸虫病

n=31

慢性血吸虫病

n=209

循环抗原

血吸虫抗体

虫卵抗体

4619.17

17974.58a

16870.00a

619.35

2374.19a

2167.74a

4016.67

15674.64a

14770.33a

注:与循环抗原检出率对比,aP0.05

2.2  各项联合检测检出情况  联合检测中三种方法联合检测阳性率>血吸虫抗体+虫卵抗体>循环抗原+虫卵抗体循环抗原+抗体P0.05),见表2

2  各项联合检测检出情况对比(n=240%

组别

阳性数(阳性率)

 

循环抗原+抗体

循环抗原+虫卵抗体

血吸虫抗体+虫卵抗体

三种方法联合检测

17874.17a

19681.67a

22392.92ab

23899.17b

 

注:与三种方法联合检测对比,aP0.05;与循环抗原+抗体对比,bP0.05

3  讨论

血吸虫病属于临床上危害较大的寄生虫病,传染性强,已成为国家重点防治疾病。临床对血吸虫病的诊断在疾病防治工作中起举足轻重的作用,能为防治计划的制定与实施提供可靠的科学依据。经过多年防治工作的实施,血吸虫病存在感染率低、感染度低的特点,采用病原学检测易出现漏诊现象,加重患者病情进展,且该检测方法操作复杂,患者依从性低,检测人员工作量大[4]。随着免疫学检测技术的不断发展与完善,免疫学诊断以操作便捷、检出率高、敏感度高等优势在血吸虫病的诊断中得到广泛应用。血吸虫循环抗原、抗体、虫卵抗体的检测是诊断血吸虫病的主要指标,本文采用酶联免疫吸附试验法、胶体染料法、胶体金免疫渗滤斑点法进行单独检测与联合检测,旨在寻找一种敏感度高、准确率高的诊断方法。经研究得出,血吸虫循环抗原检测对晚期血吸虫病、慢性血吸虫病的检出率分别为19.35%16.67%,均低于血吸虫抗体、血吸虫虫卵抗体单独检测的检出率,由表1可知。血吸虫循环抗原是寄生虫自身分泌的一种成分,能够反映寄生虫感染度及活动性感染情况[5-6],但由于血吸虫在生长的不同阶段产生的抗原具有差异性及特异性,会影响循环抗原检测的效果,加之随着防治工作的加强,会降低患者机体内血吸虫循环抗原含量,因此,采用血吸虫循环抗原单独检测检出率较低。血吸虫抗体、血吸虫虫卵抗体的诊断区别为抗体分别来源于成虫、虫卵,两种检测方法均具有较高的敏感度,检出率分别为74.58%70.00%,但部分患者仍然存在假阴性现象。有研究显示,血吸虫病因宿主差异,抗原、免疫复合物、抗体的最佳检测时机也具有差异性,采用单独检测难免出现漏检现象[7]。因此,联合检测能有效避免漏检现象的发生,阳性率高达99.17%三种方法联合检测阳性率>血吸虫抗体+虫卵抗体>循环抗原+虫卵抗体循环抗原+抗体,由表2可知,与相关文献得出结果一致[8];说明三种方法联合检测是血吸虫病最佳检测方法。

综上所述,在血吸虫病患者中采用三种方法联合检测取得较显著的诊断价值,疾病检出率高,其敏感性、特异性均高于各种方法单独检测,可有效减少漏诊现象,值得在血吸虫病的防治工作中进行推广及应用。

 

参考文献

[1] 陈海霞,李家萌,孔玉方,.血吸虫病现代诊断技术的研究现状[J].寄生虫与医学昆虫学报,2018,25(1):56-60.

[2] 陈凤,陈绍荣,杨慧,.免疫学方法联合检测血吸虫病的初步研究[J].寄生虫病与感染性疾病,2014,12(1):7-11.

[3] 蔡玉春,陈韶红,田利光,.基于A1E3B1C4单克隆抗体检测日本血吸虫循环抗原ELISA法的建立及现场初步应用[J].中国血吸虫病防治杂志,2014,26(1):42-45,89.

[4] 杨晨希,周旻,杨传印,等.岳阳市血吸虫病65年流行特征及防治结果[J].当代医学,2017,23(10):1-5.

[5] 陈木新,陈家旭.3ELISA试剂盒检测并殖吸虫病的效果评价[J].中国血吸虫病防治杂志,2016,28(3):264-268.

[6] 文良军,王友斌,徐肇纲,等.135例急性血吸虫病例IHA检测抗体滴度效价分析[J].中国血吸虫病防治杂志,2017,29(2):222-224.

[7] 鲁燕飞,时红云,李超伟,等.血吸虫病临床检验现状与研究进展[J].国际医学寄生虫病杂志,2015,42(4):236-239.

[8] 陈凤,陈绍荣,罗天鹏,.3种免疫学方法联合检测用于高原山区血吸虫病流行病学调查的研究[J].寄生虫病与感染性疾病,2015,13(4):184-187.