γ-干扰素释放酶联免疫试验在结核病诊断中的临床价值

临床

（赣州市第五人民医院检验科，江西  赣州  341000）

Clinical value of γ-interferon release enzyme-linked immunosorbent assay in the diagnosis of tuberculosis

Yang Jianlin, Luo Yizhen, Zeng Jiang

(Department of Clinical Laboratory, The Fifth People's Hospital of Cangzhou City, Ganzhou 341000, China)

摘要：目的  对γ-干扰素释放酶联免疫试验在结核病诊断中的临床价值进行分析。方法  选肺结核病患者86例为观察组，另取同期非肺结核病患者和健康体检者各86例，分别定义为非肺结核组和对照组，对3组受试者展开全血、血清、痰液γ-干扰素释放酶联免疫试验，同时进行抗酸染色、结核抗体痰TB-DNA检测，并对检测结果进行统计分析。结果  观察组、非肺结核组、对照组各组TB-IGRA、痰涂片、结核抗体、TB-DNA检测阳性率比较，差异具有统计学意义（P＜0.05）；TB-IGRA对结核杆菌诊断的敏感性为81.18%，特异性为86.13%，较抗酸染色、结核抗体、痰TB-DNA检测敏感性发生显著升高（P＜0.05）。结论  γ-干扰素释放酶联免疫试验在结核病诊断中具有显著临床价值，可为临床肺结核病诊断提供可靠的参考依据，值得关注并推广。

关键词：γ-干扰素释放酶联免疫试验；肺结核；结核分枝杆菌；诊断

    目前，在我国乃至全世界范围内对结核病进行诊断的方法主要包括临床症状表现观察、影像学特征和实验室检查等，PPD试验、抗酸染色、结核菌培养、TB-DNA检测、结核抗体等是近年来在临床上较为常用的几种实验室检查方法，但上述方法在实际应用过程中均会表现出一定的缺陷^[1-2]。γ-干扰素释放试验：采用结核分枝杆菌所具有的一种较为特殊的缺失区域中的两种抗原-ESAT-6和CFP-10，对T淋巴细胞分泌γ-干扰素的过程进行刺激作用，而卡介苗和自然环境当中所存在的大多数非结核分枝杆菌中均没有上述两种抗原^[3-4]。 本次对γ-干扰素释放酶联免疫试验在结核病诊断中的临床价值进行分析为。现报道如下。

1  资料与方法

1.1  临床资料  研究中资料来源于本院收治的，获得临床确诊的肺结核病患者，共计选择86例作为研究对象，定义为观察组，另取同期非肺结核病患者和健康体检者各86例作为对照，分别定义为非肺结核组和对照组。观察组中包括有男48例，女38例，年龄28～76岁，平均（43.5±11.6）岁；非肺结核组中包括有男45例，女41例，年龄27～73岁，平均（41.8±12.3）岁，包括支气管哮喘38例，慢性阻塞性肺疾病27例，肺癌6例，肺脓肿15例；健康对照组中包括有男44例，女42例，年龄25～74岁，平均（42.7±10.8）岁。3组受试者年龄、性别等指标比较，差异无统计学意义，存在可比性，肺结核患者符合《中华医学会临床诊疗指南／结核病分册》中的诊断标准，非肺结核患者均符合临床相应诊断标准。全部受试者均自愿接受临床检查，并签署了知情同意书。

1.2  方法

1.2.1  仪器与试剂  TB-IGRA诊断试剂盒（ELISA法，购自北京万泰）；荧光定量PCR仪及配套TB-DNA试剂（购自中山达安DA7600）、酶标仪（购自帝肯sunrise）、结核抗体试剂盒（购自北京万泰）。

1.2.2  检测方法  所有检测均严格按照标准操作规程进行，抗酸染色法采集患者晨痰进行涂片镜检，连续检测3天；TB-DNA检测采取荧光定量PCR法进行；结核抗体检测采取酶联免疫试剂盒进行血清学检测；TB-IGRA检测：采集受试者静脉血5ml，置于肝素锂抗凝采血管中，按照每管1nl分装至测定管（T管，含ESAT-6和GFP-10），本底对照管（N管，含基质液），阳性对照管（P管，含非特异性刺激原），37℃恒温静置培养温育22～24小时。离心取血浆-20℃低温冷冻保存，备用。取包被鼠抗人INF-γ的IgG亚型单克隆抗体的微孔板，在相应的测试孔当中分别的加入样品稀释液和培养液，加入的剂量分别为20μl和50μl；在标准品孔当中则要加入样品稀释液，剂量为20μl，还需要加入梯度浓度水平的新鲜配置而成的标准品各50μl，加入标准品的梯度浓度分别为400pg/ml、200pg/ml、100pg/ml、50pg/ml、25pg/ml、12.5pg/ml，空白孔中不需要加入任何的液体。在37℃的环境中进行为期1小时左右的温育处理，随后加入剂量为50μl的酶抗体，继续在37℃的条件下进行为期1小时的温育。之后用洗涤液进行洗涤处理后，在每个孔中加入显示剂A液和B液，剂量均为50μl，在37℃且避光的条件下进行15min左右的反应。最后加入终止液进行终止反应，在10min内在酶标液上对各孔在450nm波长条件下的处吸光度水平进行测定。 以标准品的抗原含量及吸光度做标准曲线，同时对T、N、P管中血浆相应的INF-γ含量水平进行计算，按试剂说明书中的具体要求，对相关的结果进行判断。

1.3  统计学方法  采取SPSS18.0处理数据，计量资料经（±s）表示，进行t检查，计数资料进行Χ²检验，P＜0.05差异有统计学意义。

2  结果

2.1  各组TB-IGRA阳性率比较  经统计发现，观察组、非肺结核组、对照组各组TB-IGRA、痰涂片、结核抗体、TB-DNA检测阳性率比较，差异具有统计学意义（P＜0.05），见表1。

表1  各组不同检测方法诊断阳性率比较结果统计

2.2  不同诊断方法对肺结核的诊断敏感性、特异性比较  γ-干扰素释放酶联免疫试验对结核杆菌诊断的敏感性为81.18%，特异性为86.13%，较抗酸染色、结核抗体、痰TB-DNA检测敏感性发生显著升高（P＜0.05），见表2。

表2  不同诊断方法对肺结核的诊断敏感性、特异性比较结果统计

3  讨论

结核病是由结核杆菌感染而导致出现的一种较为严重的传染性疾病，病情的出现会对患者及他人的机体健康和生命安全造成严重的威胁，长期以来该疾病始终是全球范围内所面临的一项重大的公共卫生问题，临床症状表现观察、影像学特征和病原学分析，是目前临床对该病进行诊断的主要方式，仍然缺乏准确、快速、可靠的对传染病菌进行检测的方法^[5-6]。传统的抗酸杆菌染色及结核杆菌培养技术，在实际应用中证明敏感性和特异性不是十分理想，且检测速度较慢^[7]。结核菌感染的免疫反应主要是由负责细胞介导的一种免疫反应，T淋巴细胞被结核菌抗原致敏之后，受到再次刺激之后被活化的效应T淋巴细胞就会产生细胞因子γ干扰素^[8]。IGRA的基本工作原理正是通过加入结核特异抗原ESAT-6和CFP-10，经过全血抗原递呈细胞刺激特异性Rh1细胞，从而产生相应的INF-γ，在37℃的条件下进行体外培养之后，对培养液当中的INF-γ的具体含量进行测定，以对体内结核特异性T细胞应答的强弱程度进行反映，并对结核分枝杆菌感染状况做出间接的判断^[9]。TB-IGRA已经成为目前临床对结核菌感染进行检测的一种全新方法，在欧美等一些发达国家被广泛应用。

本次对γ-干扰素释放酶联免疫试验在结核病诊断中的临床价值进行分析，结果发现，观察组、非肺结核组、对照组各组TB-IGRA、痰涂片、结核抗体、TB-DNA检测阳性率比较，均存在明显差异；TB-IGRA对结核杆菌诊断的敏感性为81.18%，特异性为86.13%，较抗酸染色、结核抗体、痰TB-DNA检测敏感性发生显著升高。与相关文献报道相似^[10]，说明γ-干扰素释放酶联免疫试验在结核病诊断中具有显著临床价值，可为临床肺结核病诊断提供可靠的参考依据，值得关注并推广。

参考文献

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