时间：2019-10-16 10:44 来源：当代医学 作者：邹标1，王圆美2，邱锡荣1
（1.抚州市第一人民医院检验科，江西 抚州 344000；2.抚州市第一人民医院病理科，江西 抚州 344000）
Analysis of the Causes of
Loss of Control of HIV Antibody by Enzyme Linked Immunosorbent Assay
Zou Biao1,Wang YuanMei2,Qiu XiRong3
（1.Inspection Division，Frist People’s Hospital Of
FuZhou JiangXi FuZhou 344000）
(2.Pathology Dep,Frist People’s Hospital Of FuZhou JiangXi
FuZhou 344000）
摘要：目的 分析酶联免疫吸附试验（ELISA）检测艾滋病（AIDS）病毒抗体失控原因。方法 抽取2013年2月至2018年11月本院检验科接受艾滋病病毒（HIV）抗体筛查疑似AIDS患者92例，抽取所有受试者静脉血采用ELISA方法检验HIV抗体，以蛋白印迹实验（WB）作为参照，统计诊断结果，并分析ELISA检测HIV抗体失控原因。结果 WB共检测出阳性14例，阴性78例。ELISA共检测出阳性13例，阴性74例，漏诊1例，误诊4例。经追溯分析发现，4例误诊者中，1例标本污染，2例标本溶血，1例因血液标本处理不恰当，受到浓度较高的非特异性免疫球蛋白影响出现假阳性；1例漏诊因标本中含有补体引起。结论 ELISA检测艾滋病HIV抗体失控影响原因涉及标本、试剂、人员操作技术、温度、检测仪器是否校准等多个环节，临床应针对以上因素制定相关措施，以确保ELISA检测的可靠性及准确性。
关键词：艾滋病；酶联免疫吸附试验；艾滋病病毒抗体；失控
艾滋病（Acquired immunodeficiency syndrome，AIDS）是一种传染性极强的免疫缺陷性疾病，主要通过母婴、血液、性接触等途径感染艾滋病病毒（HIV）引起。AIDS主要攻击人类免疫系统，可引发咳嗽、反复发热、腹泻、血便、偏瘫、智力精神异常等多种全身症状，致残致死率较高[1]。近年来，我国AIDS患病率有上升趋势，已成为威胁人类生命健康的重大疾病之一，及早选取安全可靠的方法对其进行筛查具有重要意义[2]。酶联免疫吸附实验（ELISA）作为一种固相免疫检测方法，具有操作简单、便捷、特异性强、灵敏度高、可多次重复操作等特点，是确认是否感染HIV的有效途径之一，但临床实践发现，在实际操作时，受技术及其他因素影响，依然存在假阳性、假阴性结果[3]。本研究选取疑似AIDS患者92例，分析ELISA检测HIV抗体失控原因，以期能为临床诊治提供参考依据，现报道如下。
1 资料与方法
1.1 临床资料 抽取2013年2月至2018年11月本院检验科接受HIV抗体筛查疑似AIDS患者92例，其中来自性病门诊患者62例，来自孕产期检查14例，其他就诊检查者16例；男43例，女49例；均采用ELISA检测HIV抗体。
1.2 样本采集及处理 抽取所有受试者新鲜空腹静脉血，采集过程中注意保持无菌，同时防止剧烈震荡。标本采集后常温下放置1～2h，当血液凝固后以1500～3000r/min的速度离心10～15min，若5d内检测，可保存在2～8℃的环境中，若7d后检测，应保存在-20℃环境中。
1.3 试剂选取 选取珠海丽珠试剂股份有限公司，试剂在国家食品药品监督管理局注册，检测合格并在有效期内，严格按照试剂盒说明进行操作。全自动酶标仪为北京普朗DM9602，洗板机北京普朗9620。
1.4 阳性结果判定标准 以450nm波长测得各孔值，样本吸光度/阳性判断值(S/c.o)＜1则为阴性，≥1为阳性。
2 结果
2.1 检测结果 以蛋白印迹实验（WB）作为参照，共检测出阳性14例，阴性78例。ELISA共检测出阳性13例，阴性74例，漏诊1例，误诊4例。
2.2 ELISA检测HIV抗体失控影响因素 经追溯分析发现，在ELISA检测时，失控因素涉及标本、试剂、温度控制、人员操作技术等多种因素。4例误诊者中，1例标本污染，2例标本发生溶血，1例因血液标本处理不恰当，受到浓度较高的非特异性免疫球蛋白影响出现假阳性。1例漏诊因标本中含有补体引起。
3 讨论
ELISA法检测HIV抗体失控影响原因涉及标本、试剂、人员操作技术、温度等，临床应针对以上因素制定相关措施，是避免及减少误诊的关键所在。本研究对92例疑似AIDS患者采用ELISA进行HIV抗体检测，结果发现4例误诊、1例漏诊，分析失控原因认为与以下因素相关：
3.1 标本干扰因素 ①内源性干扰因素：目前因标本采集时，受到类风湿因子、补体、高浓度非特异性免疫球蛋白等因素影响，导致检测结果假阴性及假阳性[4]。处理方法：标本采集后可用pH为7.2，浓度为0.01mol/L的磷酸盐缓冲液对其进行稀释，并在56℃温度下对血清灭活0.5h。②外源性干扰因素：在血液标本采集、送检、保存等过程中因操作不当造成标本污染、溶血、加入抗凝物质、标本存储时间过长、凝集不全等[5]。处理方法：A.在标本采集过程中严格按照无菌操作执行，采集后避免过度剧烈震荡引起溶血；B.标本采集后应在常温下放置1～2h，当血块收缩或血液凝固后，方可进行离心操作，并立即吸出上清液；C.应立即检测标本，若无法立即送检，5d内检测的可保存在2～8℃环境中，若7d后检测，应保存在-20℃环境中。D.标本中加入抗凝物质时尽可能的不用酶抑制剂，以免影响ELISA试剂中酶的活性。
3.2 ELISA试剂选取 ①试剂选取：HIV抗体检测所有试剂盒必需经过国家注册批准，且检验合格，无过期现象。在挑选试剂盒时，应根据检测报告、室间质评估数据，临床评估数据、选取特异性、灵敏性高的试剂盒。②预处理：检测时做好预处理工作，每次使用试剂盒之前，应先在室温下静止0.5h，使用前确保试剂温度与室温相似，以免影响抗原抗体结合及反应速度而引起检测结果偏差。③注意事项：因不同批号及厂家试剂中酶标记物的酶浓度值存在一定差异，因此不同厂家及批号的试剂不能混用。④确保试剂盒对照品质的有效性，试剂盒内部所提供的阴性及阳性质控品，只能使用同批次的试剂盒验证其有效性，若无效，应重新检测。
3.3 检测仪器调试及维护 《全国艾滋病检测技术规范》[6]中对艾滋病各种仪器的校准及维护在方法及时间上均做了明确规定。个别实验室操作人员因思想上重视程度不够，认为仪器正常不出故障就能使用，忽略了因仪器的偏差而影响实验结果的准确性。①酶标仪：酶标仪因长时间得不到有效维护，光学系统会因灰尘遮挡而使波长发生变化，进而影响酶标仪判读结果。同时为确保测得数据的稳定性及准确性，每次检测标本吸光度前，应先将酶标仪开机预热20min以上，并在15min内读取结果。②洗板机：洗板机使用后冲洗管路不及时，堵塞影响洗板效果，增加假阳性率[7]。因此每次使用后应先用蒸馏水冲洗管道，以确保洗板机的清洁度。此外板的洗涤次数为5～6次，浸泡时间为50s。③加样：加样时通常会用到移液器，加样量较小时短时间内应结束加样，若加样量较大，应分批次操作，且每个批次之间应间隔一定时间，以免相互干扰受影响。同时加样时应先摇晃滴瓶，预吸几次挤去第一滴后再滴加，以免产生气泡，同时加样应垂直加样，并加到酶标板孔底部，以免污染样本，影响判读结果。
3.4 温度 温度是ELISA检测过程中造成HIV检测失控最重要的原因之一[8]。①恒温箱温度控制：随着智能技术的应用，现今多数医院使用的恒温箱均带有显示温度的功能，但临床实践发现，多数恒温箱面板中显示的温度与实际温度存在一定差异，因此可在恒温箱内放置一温度计，掌握其准确温度。②试剂盒及血清样本在使用前应在室内静止30min，等其温度平衡后再使用。若实验试剂未用完，可存在放有干燥剂的密封袋内置入冰箱保存，同时应标明试剂具体使用情况。③ELISA以酶催化底物显色来评定结果，而抗体抗原结合及酶催化底物的效率和温度关系密切，若温度低则显色浅，S/CO值低，温度高则显色深，S/CO值高，影响结果判定。
3.5 实验室技术人员因素 在更换新试剂时，因操作人员对新试剂性能不熟悉，造成震荡力度不均匀，加样量不准确、试剂预温处理不到位等，造成结果偏差甚至错误。
综上可知，ELISA法检测艾滋病HIV抗体失控影响原因涉及标本、试剂、检测仪器是否校准、人员操作技术、温度等多个环节，临床应针对以上因素制定相关措施，以确保ELISA检测的可靠性及准确性。
参考文献
[1] 张静,方静,郑萍.ELISA法检测HIV抗体的室内质控分析及处理[J].临床血液学杂志:输血与检验,2015,28(6):1067-1068.
[2] 倪晓媚,徐成芬,曾永.ELISA检测HIV抗体中临界值质控血清的制备[J].预防医学,2014,26(4):431-432.
[3] 张杰.影响ELISA法检测HIV抗体准确性的若干因素和质控研究[J].临床医学研究与实践,2016,1(16):119.
[4] 孙海.酶联免疫吸附试验筛查HIV抗体在艾滋病临床诊断中的意义[J].医疗装备,2018,31(10):48-49.
[5] 朱柏林.金标层析法与酶联免疫吸附试验初筛HIV1+2型抗体对比分析[J].检验医学与临床,2014,11(10):1341-1343,1346.
[6] HIV抗体筛查阳性标本与免疫印迹试验结果的对比分析[J].河南预防医学杂志,2014,25(5):401-403.
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