济南军区青岛第一疗养院检验科 张冬梅
摘要 目的 探讨乙肝五项定量检测在临床中的应用效果。方法 对150例临床标本进行ELISA、IRMA、SPPIA法进行检测，并行血清HBV-DNA荧光检测。 结果 用IRMA、SPPIA定量法检测在HBSAg浓度为0.5ng/ml时即能检出，还可动态监测各项指标浓度。而用ELISA定性法，在HBSAg浓度为2ng/ml时方能检出，易出现假阴性，且只提供阳性或阴性指标。 讨论 用IRMA、SPPIA定量法检测HBSAg，其灵敏度高，与HBV- DNA可互补，为临床提供治疗依据及判断预后。
关键词 乙肝五项 定量检测
血清乙型肝炎标志物，我们临床常说的乙肝五项，又称“两对半”测定。自临床开展以来，对乙肝疾病的诊断、病情的监测、疗效的观察，起到一定的作用。现常用的酶联
免疫粘附试验（ELISA），机理是在包被抗原或抗体，加入标本后，再用酶标记的抗原或抗体测定抗体或抗原，使底物显色。但只能提供临床结果阳性或阴性，无法动态观察病情和疗效变化，且易出现假阴性，给临床治疗带来干扰；在早期，即“窗口期”ELISA不一定能检测出HBSAg。随着检验医学的发展，对乙肝“两对半”定量的检测已经成为可能。我院对150例临床标本进行ELISA、IPPIA、IRMA乙肝“两对半”的检测，比较发现用定量检测乙肝“两对半”更灵敏，弥补了定性检测的不足。与血清HBV-DNA荧光测定相互补充，可动态观察病情和疗效变化。现报告如下。
1 资料和方法
1.1 一般资料：临床标本150例，其中男95例，女55例，年龄18~37岁，平均28岁。
1.2 方法：定量法IRMA、SPPIA，试剂由北京北方生物技术研究所提供。HBV-DNA检测用杭州高乐公司试剂，美产DE9600基因扩增仪。定性法（ELISA），用深圳月亮湾试剂，美产MR500酶标仪。
1.3 机理：定量法原理是使标记抗原和抗原极限量抗体发生竞争性结合，反应平衡后，加入分离剂，使游离抗原与抗原抗体复合物分离，测定沉淀中放射性物质量。
1.4 所有操作均严格按操作说明操作
2 结果：
2.1 HBSAg：（1.25±0.25）ng/ml；HBSAb：（8.6±0.65）miu/ml;HBEAg:(0.65±0.15)ncu/ml;HBEAb:(2.60±0.57)ncu/ml;HBCAb: ( 3.2±0.65)ncu/ml. 有17例经IRMA、SPPIA定量检测HBSAg为0.5~1.3ng/ml,而ELISA定性为阴性。
3 临床意义：
3.1疾病的发生、发展、疗效、预后是一个动态的变化过程。定性检测只能给临床提供阳性或阴性结果，不能动态观察病情变化。对于乙肝“两对半”的阴性或阳性结果意义大家都烂熟于心，经过治疗后，结果却无明显的变化，病员及医生有时会产生悲观的情绪。而实际上各指标已经改变，但不能动态观察到。定量检测乙肝“两对半”各项标志物的浓度变化可对乙肝的病程、治疗、预后起一个动态监测的作用，能够让医生对治疗效果作出合理的解释提供依据，指导治疗。如：定量分析HBsAg和HBsAb浓度的变化，可以预见急性乙肝是否处于恢复期。定量分析HBeAg和HBeAb浓度的变化，可以反映病情变化和治疗效果。HBcAb浓度的高低可以反映病毒感染的状态，高浓度的HBcAb提示乙肝急性感染；低浓度一般为恢复期或既往感染，有利于对慢性肝炎活动性和非活动性的判断，可以用于慢性乙肝的分类。定量检测与血清HBV DNA 荧光测定相互补充，可正确判断预后及治疗。
3.2定量测定极大提高了临床检测的灵敏度 本组用IRMA技术检测在HBSAg 浓度为0.5ng/ml时即可检出，而用ELISA检测HBSAg达2ng/ml时才会阳性。本组17例中，HBSAg 浓度在0.5~1.3ng/ml，故用ELISA检测不出来；病毒发生变异后，表达量较低，常规ELISA测不出抗原，易产生假阴性。而定量检测具有极高的灵敏度，可同时检测出HBsAg和HBsAb。而血清中HBsAg含量与病人对HBsAg细胞免疫成反比关系，而肝功能改变则与此种细胞免疫成正比。定量HBsAg是反映这一关系的唯一手段。
3.3急性乙肝早期，酶标检测HBsAg在乙肝早期往往呈阴性。定量能及早检出HBsAg,确定HBV感染，几乎能与PreSi同时检测，在病程观察中大大缩短了“窗口期”。而在慢性乙肝中一些患者由于机体常缺乏对HBV包膜蛋白的免疫应答，HBsAg表达较低，酶标检测可出现HBsAg和HBsAb均阴性的情况，给临床治疗带来假阴性的结果，延误治疗。而定量检测则可避免这些情况的出现，为正确判断病情提供依据。
3.4HBSAb的定量测定 能够对抗体是否真正具有“中和”HBV的免疫力作出正确评价，对乙肝的预防起到监督作用。临床上经常可以看见许多病人，包括一些医务工作者，看见HBSAb阳性，以为机体就有了免疫力了。其实不然，HBsAb的含量在10 mIU/ml~100 miu/ml之间的，定性虽为阳性，但此时机体对HBV的免疫力较弱，甚至不能预防HBV感染，仍有感染HBV的危险。HBsAb的含量在10 mIU/ml以上的病人在用ELISA检测就可呈HBsAb阳性结果，但并不提示机体都一定具有免疫力。作为定量测定，根据HBsAb的含量可以判断机体对HBV的免疫状态及乙肝疫苗的免疫效果。
3.5血清HBV- DNA荧光定量检测 PCR测定可以直接反映病毒复制状态具有很多临床
应用价值。但不能完全反映病毒静息期肝细胞内HBV病毒状态，HBV-DNA阴性并不完全代表体内HBV已被清除。所有结果应结合“两对半”各项定量指标更能客观反映体内HBV病毒状态，正确判断预后及治疗。如HBV-DNA阴性而HBsAg、HBeAg或HBeAb及HBcAb浓度均还较高，提示并未完全痊愈，有可能病毒再次出现复制状况，尚需密切关注。如HBV-DNA阴性而HBsAg、HBeAg或HBeAb及HBcAb浓度均很低或阴性并持续一段时间，提示可能完全痊愈，预后疗效良好。
所以临床上采用乙肝“两对半”定量测定乙肝标志物的浓度，能够使病人对了解自己病情有更清楚的了解，提高治疗信心。同时也使医生有的放矢，有利于疾病的治疗。
参考文献
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