EGFR和P53在胃癌中的表达及其临床意义

胃癌是源自胃粘膜上皮的恶性肿瘤，是威胁人类健康的一种常见病。大量的实验研究表明，胃癌的发生是一个多因素、多基因变异所致的病变过程[1]。本研究采用免疫组织化学法(S-P法)对胃癌及正常胃粘膜组织石蜡标本切片同时检测EGFR和P53三种癌相关基因蛋白产物，观察这三种癌相关基因在胃癌的表达情况，并就其临床意义进行了简要分析。

1材料与方法
1.1 研究对象 
实验所用的胃癌组织取自浙江省桐庐县第一人民医院和浙江大学医学院附属第二医院1999年6月～2001年8月临床及随访资料完备的原发性胃癌石蜡切片存档标本，共78 例，年龄27～79岁，平均年龄52.3岁，其中男性55例，女性23例，均经过病理学检查证实为胃癌。
1.2  免疫组织化学方法
    采用S-P染色法，第一抗体为：鼠抗人EGFR单克隆抗体、鼠抗人P53单克隆抗体（均为福州迈新生物技术开发公司产品）。使用该公司免疫组化S-P试剂盒，常规免疫组化染色，DAB显色。以PBS液代替一抗做阴性对照；以己知EGFR和P53均阳性的结肠癌石蜡标本作阳性对照。
1.3  结果判定
肿瘤细胞胞浆、胞核、胞膜出现棕黄色颗状，且其着色强度高于背景非特异性染色者判定为阳性。判断结果参照1996年全国免疫组织化学技术与诊断标准化专题研讨会意见，以连续观察10个高倍视野(10×40) ，免疫反应阳性细胞数超过25%作为组织阳性诊断标准。免疫反应阳性细胞数占总细胞数小于25%为(－)，25%～50%为(＋) ，50%～75%为(++) ，大于75%为(+++)。
1.4  生存期评估方法
    生存期按生存3年以下、3～5年和5年以上分为3组，分别统计EGFR和P53表达阳性和阴性者的3年和5年生存率。
1.5  统计学处理
 采用x2检验法，以P<0.05为差异有显著性。

2结   果
2.1 EGFR和P53的表达
78 例胃癌中有32例EGFR染色阳性，阳性率为41.0%，阳性产物为明显的棕黄色颗状染色，主要位于细胞膜，胞浆中亦有少许着色；P53染色阳性有54例，阳性率为69.2%，阳性产物定位于细胞核，为明显的棕黄色颗状染色。
2.2 临床病理参数与胃癌EGFR和P53表达的关系
胃癌EGFR和P53的表达与患者的性别和年龄无关(P＞0.05) 。EGFR的表达与胃癌患者肿瘤直径无显著性相关(P＞0.05) ，而在分化程度较好者（高分化＋中分化）中的阳性率低于分化程度较差者（低分化＋未分化） (P＜0.05)，在侵及浆膜层胃癌中的表达率高于未侵及浆膜层（P＜0.05），有淋巴和远处转移的胃癌患者EGFR的阳性表达率高于无淋巴和远处转移的胃癌患者，差异有显著性(P＜0.05)。P53的表达与胃癌患者肿瘤直径、分化程度、浸润深度和有无淋巴转移无显著性相关(P＞0.05) ，有远处转移的胃癌患者p53基因的阳性表达率明显高于无远处转移的胃癌患者，差异有显著性(P＜0.05)。EGFR、P53和PCNA的表达与胃癌预后的关系
本研究中分别将EGFR、P53表达阳性和阴性者的同期生存率相比较后发现，表达阳性者的3年和5年生存率均显著低于其表达阴性者(P＜0.05及P＜0.01)。EGFR、P53和PCNA表达之间的相互关系。EGFR和P53同时表达异常的3年和5年生存率分别为29.2%（7/24）和8.3%（2/24），显著低于单项表达异常者(P＜0.01)。
本研究发现，EGFR的表达与P53的表达呈正相关(P＜0.05)。

3讨    论
EGFR是原癌基因c-erbB-1(也称HER-1) 的表达产物。对表皮生长因子(EGF) 具有高度亲和性，二者特异结合后，激活酪氨酸激酶，促发细胞分裂信号，引起细胞增殖。EGFR表达异常，可导致正常细胞转化成无限生长的肿瘤细胞，并增加肿瘤的侵袭、转移能力［2］。EGFR广泛分布于食管癌、胃癌、胰腺癌、肠癌以及乳腺癌、前列腺癌等肿瘤中，并能在EGF及其它配体刺激下促进上述癌细胞生长。许多资料研究表明EGFR的过度表达与某些肿瘤的发生和预后不良有关[3]。本研究表明：EGFR阳性表达的胃癌具有更大的侵袭性，肿瘤易侵犯浆膜层，此类胃癌多为分化较差的胃癌，提示在分化较差的胃癌中，c-erbB-1基因具有较高的活性；同时本研究还显示EGFR不仅与胃癌的淋巴及远处转移密切相关，而且其表达阳性者的3年和5年生存率均显著低于其表达阴性者，EGFR表达阳性者的胃癌预后差，阴性者预后好。因此，EGFR表达可作为判断胃癌预后的重要指标[4]。
P53基因在控制细胞周期和细胞凋亡过程中发挥重要作用[5]，其位于人类17号染色体短臂上，具有转录因子的活性，编码一个分子量为53KD的核磷酸蛋白。P53基因分为两种类型：野生型和突变型。野生型P53基因参与细胞周期调控，阻止细胞从G1期进入S期，对细胞分裂与增殖起负调控作用，是肿瘤抑制基因。突变的P53蛋白不能引起细胞增殖的停滞或凋亡，导致细胞生长失控，肿瘤发生[6]。P53基因突变是人类肿瘤中最常见的基因异常，人类许多肿瘤中均有不同程度的P53基因突变，如乳腺癌、肺癌、大肠癌、胃癌等，在许多肿瘤和转化细胞中突变型P53基因通常高水平表达。本研究发现P53基因不仅与胃癌的远处转移密切相关，而且其表达阳性者的3年和5年生存率均显著低于其表达阴性者，P53基因突变预示病人有较差的预后，可作为胃癌患者预后的重要指标。同时，本研究显示，P53基因阳性表达率随胃癌患者肿瘤直径增大、分化程度变差、浸润深度加深和淋巴结侵犯有增加趋势，但无统计学差异，与文献报道相似[7]。
本研究中，上述三种癌相关基因中，EGFR与P53呈同步表达(正相关) ，癌基因EGFR激活和抗癌基因P53的失活同时存在更易导致肿瘤。可能原因是：P53突变后，失去了对正常胃粘膜细胞生长的调控，使胃粘膜细胞表达高水平的EGFR，进而加速细胞增殖，引起胃粘膜细胞癌变和促进胃癌发展，但其确切机理和生物学意义有待深入研究。本研究发现胃癌组织中，EGFR和P53同时表达异常者有24例，占30.1%，EGFR和P53同时表达异常的3年和5年生存率明显低于单项表达异常者。同时，现代分子生物学研究认为：恶性肿瘤的发生至少需要两个或两个以上活化的细胞癌基因协同作用才能使正常细胞发生恶性转化[8]，胃癌的发生是一个多因素、多基因变异所致的病变过程，故多基因的联合检测更能充分反映胃癌的生物学行为，对判断肿瘤的恶性程度、预测淋巴结转移趋势、指导临床的治疗方案，以及改善患者的预后均有重要意义。

参考文献
[1]Wang LD, Stephanie TS, Zhou Q,et al. Changes in p53 and cyclin Di protein levels and cell proliferation in different stages of human esophageal and gastric-cardia carcinogenesis.  Int J Cancer,1994，59:514.
[2]Aaronson SA .Growth factor and cancer .Science (Wash DC).1991，254(5035):1146.
[3]Castellani R, Visscher DW, Wykes S, et al .Interaction of transforming growth factor-alpha and epidermal growth factor receptor in breast carcinoma,an immunohistologic study. Cancer,1994;73(2):344-349.
[4]孙学军，曹思之, 许延发, 等. 胃肿瘤中EGFR、C-erbB-2及PCNA的表达及其临床意义. 中华普通外科杂志,2000,15(8):501-502.
[5]Dabiya R, Deng G, Chen KMK, et al. p53 tumor-suppresser gene mutations are mainly localized on exon 17 in human primary and metastasic prostate cancer. Br J Cancer,1996, 74(2):264-268.
[6]Mekrantz W, Schlegel R. Apoptosis and cell cycle. J Cell Biochem,1995，58(2):160.
[7]Liu ZH,Xie Lx,Xu WB. Expression and significance of P-glycoprotein and p53 protein in gastric cardiac carcinoma. Practical J Cancer.2003,18(1) ：52-53.
[8]Slamon DJ, Dekernion JB, Verma IM, et al. Expression of cellular oncogenes in human malignancies. Science,1994，224(4646):256-262.