乙肝表面抗体定性和定量的两种检测方法对比分析

随着“乙肝三系”免疫学方法的不断发展，如何提高检测灵敏度和特异性，以达到检测准确率成为大家共同追求的目标。乙肝表面抗体测定是乙型肝炎疫苗免疫效果的唯一指标。目前，乙型肝炎表面抗体的检测常规都用酶标免疫（ELISA）定性检测，而近来时间分辨荧光免疫分析技术在临床应用结果表明，TRFIA具有高特异性、高灵敏度、高稳定性等特点。有文献报道，乙肝病毒感染主要发生在婴幼儿时期，为此，检测幼儿抗-HBs具有重要意义。本研究用TRFIA法测定本地1030名幼儿学生的抗-HBs水平，并以ELISA作对照，现报道如下：

1  材料和方法
1.1 标本来源：1030名幼儿，年龄2-6岁，来自我镇各幼儿园学生，均按“0、1、6岁”程度进行过乙肝疫苗接种。
1.2 试剂：时间分辨荧光免疫（TRFIA）试剂由上海新波生物技术有限公司出品。ELISA试剂由上海科华生物技术有限公司出品。
1.3 抗-HBs定值质控品：购于卫生部临检中心，浓度为30mIU/ml。
1.4仪器：ELISA法用Bil-550酶标仪，兰勃II型洗板机；Anytest-2000时间分辨荧光免疫分析仪（半自动）及其配套洗板机。
1.5 ELISA和TRFIA两种方法均严格按说明书操作判断结果。

2  结  果
2.1两法阳性率比较：TRFIA≥10mIU/ml为阳性，ELISA法以S/C.0≥1.0为阳性，结果见表1 
表1   TRFIA法和ELISA法抗-HBs结果
  方法         总数       阳性例数     阳性率%
ELISA       1030         330            32%
TRFIA       1030         560            54%
上表显示ELISA阳性为330例，阳性率为32%，而TRFIA抗-HBs阳性为560例，阳性率为54%，两法阳性率差异显著。330例ELISA法阳性的标本，用TRFIA法检测全部阳性，而560例TRFIA法阳性的标本，用ELISA法检测阳性仅330例，230例TRFIA阳性而ELISA测定呈阴性的标本，用TRFIA测定显示抗-HBs浓度都在10-45mIU/ml之间。
2.2线性比较
3份高值抗-HBs血清混合，六点倍比稀释。TRFIA在0-1280mIU/ml范围内线性良好，ELISA在44-800mIU/ml范围内线性良好，说明TRFIA检测范围比ELISA宽。
2.3两种方法灵敏度比较
用高值质控血清86.9mIU/ml，进行倍比稀释结果TRFIA法可以测到接近于零的值，而ELISA法在44mIU/ml。在44mIU/ml以下S/C.0均≤1.0说明只能测到44mIU/ml。
2.4重复性实验
用上述两法对低（72.5mIU/ml）中（215mIU/ml）高（530.5mIU/ml）混合血清，批内试验平行测定20次，批间试验每天上、下午各测定一次连续10天，结果TRFIA法批内CV分别为3.2%、2.5%、2.0%；ELISA法分别为6.5%、5.2%、4.5%。TRFIA法批间CV分别为5.2%、4.3%、4.5%；ELISA法批间分别为9.8%、7.2%、6.5%。

3  讨  论
通过对幼儿抗-HBs检测，可判断机体对乙肝病毒感染是否具免疫力。以前最常用ELISA检测血清抗-HBs，但由于受方法学影响，其检测灵敏度相对较低；并且显示的结果不是“阴性”就是“阳性”只能作程度式的机械判断，无法动态观察病情和疗效变化，为临床所提供的信息有限。TRFIA是近年新开发的一种用镧系元素的原子作为标记物的时间分辨荧光免疫分析技术，其结果与ELISA检测结果比较，它有较高灵敏度，较好的重复性，特异性强，以及较宽的线性范围。可检测出ELISA无法检出的低浓度的标本，大大弥补了酶标定性检测的不足之处，能为血清低浓度抗-HBs的幼儿是否再进行疫苗加强接种提供一个有效的判断依据。是目前最有发展前景的分析手段，因此TRFIA值得在临床实验室推广应用。

参 考 文 献
[1]徐慧文，李东升，徐经武，等.国产血源性乙肝疫苗的无期效果评价.中华流行病学杂志,1992,12(6):362-364